产品目录

本试剂盒首先利用红细胞裂解液(Buffer TBP)去除不含DNA的红细胞。然后通过裂解液(Buffer Digestion)裂解白细胞，使DNA游离在溶液中。再通过高盐沉淀法去除蛋白等杂质。从300μL无核抗凝血液可以获得10～20μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。

• 本试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4℃保存。
  
• Buffer Digestion、Buffer TBP中含有刺激性化合物，操作过程中应避免直接接触，如沾染皮肤或眼睛请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

• 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、1.5mL离心管、75%乙醇、异丙醇等。
  
• Buffer Digestion在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于56℃溶解后使用。
  
• 提前将水浴锅调至56℃备用。

• 样品处理
  
  • 含无核红细胞的血液样品（如人血液）：取300μL抗凝全血加入600μL Buffer TBP，充分混匀，室温放置1min至红细胞完全裂解，此时液体为透明红色。
    
  • 含有核红细胞的血液（如家禽血液）：取10～20μL抗凝全血，直接进行步骤3。
• 8000rpm，离心1min，弃上清。用500μL TE Buffer重悬沉淀，8000rpm，离心1min，小心弃掉上清，在一干净的吸水纸上倒置几秒钟，吸弃残液。可再用TE Buffer洗涤一次至沉淀为白色。
  
• 加入180μL Buffer Digestion和20μL Proteinase K溶液，震荡混匀。56℃水浴15～30min至细胞完全裂解。
  
  • 如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL的RNase A（10mg/mL），混匀后室温放置2～5min。
    
  • 水浴过程中，每10min颠倒混匀一次，可促进细胞裂解。混合液变澄清透明为裂解完全。如溶液未变澄清，说明细胞裂解不彻底，应适当延长水浴时间，否则将可能降低DNA的得率或导致提取的DNA不纯。
• 加入60μL Buffer PR，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
  
• 室温10000rpm离心5min，将上清（约200μL）转移到新的1.5mL离心管中。
  
• 加入等体积的异丙醇，颠倒5～8次使之充分混匀，室温放置2～3min。室温10000rpm离心5min，弃上清。
  
• 加入1mL 75%乙醇，颠倒漂洗1～3min，10000rpm离心2min，弃上清。
  
  • 漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。
• 重复步骤7一次。
  
• 开盖室温倒置5～10min至残留的乙醇完全挥发。
  
  • 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响后续实验。
    
  • 如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5～10min至残留的乙醇完全挥发。
    
  • 请勿过度干燥，避免用真空干燥仪进行干燥，否则后续溶解困难。
• 得到的DNA用50μL TE Buffer溶解。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
  
  • TE Buffer为10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0。